目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建人整合素连接激酶ILK基因敲除的人骨肉瘤U2OS细胞系，探讨ILK敲除对骨肉瘤细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法 首先在人ILK基因的第2,4,6外显子区域选取序列，分别设计3组靶向ILK的sgRNA,退火后与酶切lentiCRISPRv2慢病毒质粒连接，构建含有sgRNA的重组质粒，重组载体与病毒包装质粒共转染293T细胞后获得慢病毒颗粒；将病毒颗粒感染U2OS细胞，经嘌呤霉素筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株，通过测序、qRT-PCR及Western blot鉴定ILK基因稳定敲除细胞系，并进一步通过Western blot检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、Snail1、Snail2、Twist等EMT相关标记分子以及Akt的磷酸化水平。结果 构建了3组lentiCRISPRv2-ILK-sgRNA敲除质粒，经慢病毒感染U2OS细胞后及单细胞克隆株的筛选鉴定后得到了一株含有ILK等位基因突变的细胞，Western blot证实ILK-/-细胞中ILK蛋白表达缺失；相比野生型，ILK-/-细胞中N-钙黏蛋白、Snail1、Snail2及Twist蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而E-钙黏蛋白表达则显著升高(P<0.05);与野生型细胞相比，ILK-/-细胞Akt通路的磷酸化水平显著降低(P<0.05),而经TGF-β1处理后，相比野生型细胞，ILK-/-细胞中Akt激活水平亦显著下降(P<0.01)。结论 成功构建ILK-/-U2OS细胞系，敲除ILK可能通过下调Akt信号通路抑制U2OS细胞的EMT进程。